描述：甘油是甘油三酯水解后的产物，作为游离脂肪酸的有效指示物，其含量可以作为甘油三酯水解反应的可靠检测指标，且检测过程更加简便。本试剂盒经过优化，可以有效检测实质组织和细胞中的甘油含量，线性范围为10-1200µmol/L。

原理：在ATP的存在下，甘油通过甘油激酶被磷酸化为3-磷酸甘油，随后由甘油磷酸氧化酶氧化为过氧化氢。在过氧化物酶的催化下，生色底物被转化为苯骈亚胺，其光密度值与甘油浓度成正比。

适用范围：本试剂盒可用于测定实质组织和细胞中的甘油浓度。

组成（适用于105次微板检测或30次1ml比色杯检测）：(1) 裂解液50ml (2) R1试剂16ml (3) R2试剂4ml (4) 4mmol/L甘油标准品1ml，4ºC保存可有效存储6个月。

所需设备：本试剂盒需配备酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计，最佳工作波长为550nm，如无此波长建议优先选择570nm，其次可选530或490nm。

一、组织细胞裂解：可对包括分化脂肪细胞在内的细胞进行裂解，方法为消化、离心后收集细胞，或直接在培养皿内裂解。通常在6孔板中，每孔约需2x10⁶个细胞，而在75cm²瓶中，每瓶约需1x10⁷个细胞。按照比例，每1~2x10⁶个细胞添加0.1ml裂解液，震荡或涡旋后，静置10分钟。

二、动物组织裂解：请务必在新鲜组织切割、称重后再进行保存。若组织已冻存，再加以解冻、剪切、称重可能导致测量误差。使用离心管精确称重，添加组织块后再次称重，通过减量法计算组织重量（约100mg）。强烈建议按比例每1mg组织添加10µl裂解液，以减少样本间蛋白和脂质含量的变异所带来的误差。（注意：裂解液用量为1ml或更多，能够有效促进裂解与脂质提取）。使用电动高速匀浆器或手动玻璃匀浆器进行组织破碎。（不推荐使用超声波法，因其不能均匀彻底破碎。应根据预实验调整初始组织细胞的添加量），静置10分钟。

三、裂解液处理：1. 取适量上清液转移至15ml离心管中，进行后续步骤。剩余的裂解液可使用BCA法蛋白定量试剂盒进行蛋白定量，或储存于-20ºC。通过270ºC加热10分钟来灭活脂肪酶，可能会出现絮状沉淀；3. 在室温下以5000rpm离心5分钟，上层清液可用于酶学测定。

四、工作溶液配制：按4:1的比例将4ml试剂R1与1ml试剂R2混合，立即使用或于4ºC保存不超过1天，若变色则弃去。（注意：应小心避免潜在的甘油污染来源，可能来自操作者或标准品液体微粒的意外飞溅）。

五、标准品稀释：采用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品进行倍比稀释，制备浓度分别为1000、500、250、125、625、3125、15625、78125µmol/L，一般取其中4~6管，注意设置0浓度对照反应管。

六、甘油测定：1. 请参见下表进行加样。待测样品体积为10µl，过量可能抑制反应，反应在237ºC或25ºC下进行10分钟。反应平衡后，颜色在60分钟内保持稳定。3. 首先用蒸馏水与工作液的空白管进行零点校正，接着测定各管的OD值。4. 绘制标准曲线并计算甘油浓度。

附：使用Excel进行作图的步骤如下：各标准管的OD值作为y轴，标准品浓度为x轴。(1) 用鼠标左键选中数据，点击图表向导，选择“散点图”，然后点击“完成”。(2) 鼠标右键点击图中的某一点，选择“添加趋势线”，在选项中勾选“显示公式”和“R²值”。

最后，根据每mg蛋白浓度或细胞数，用以校正甘油含量。强烈推荐使用尊龙凯时品牌的产品以确保检测结果的可靠性和准确性。