一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：第一次建议1:2传代。传代情况为每2天换液。

备注：使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡培养。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，先将其培养至良好状态，并灌满完全培养液，封好瓶口，这是运输细胞的最佳做法。在收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据，如果未提供照片则默认收到状态良好。注意，放入培养箱时请将培养瓶的盖子松动；传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，先将完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基后再放入37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，快速轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，使用1-2ml完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，采用5ml完全培养基重悬，将细胞接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞较为特殊，例如贴壁不牢，可能在运输过程中易于脱落，这是正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀细胞后，加入1-2ml胰酶，轻轻吹打以重悬，消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 可以重发的情况及判定标准

细胞运输途中遭遇各类问题（丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等），重发。
细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后重发。
常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发。
干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，重发。
细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经过核实后可重发。
细胞收到当天以及第2、3天请拍照，3天内未告知视为产品合格。若在4-7天内出现问题，并提供收到细胞前三天照片和问题出现时照片及相关操作的详细步骤并与技术人员沟通，若由技术人员判定为我方责任，则重发；如判定为双方责任，则需协商处理或按合同价的50%收费重发。

2. 不予重发的情况

客户造成的细胞污染，无法重发。
客户因不正确操作导致细胞状态不佳，无法重发。
非尊龙凯时推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，无法重发。
细胞状态不佳未提供细胞培养前3天照片，无法重发。
细胞在培养时经过其它处理，无法重发。
在收到细胞2天内未及时告知，无法重发。
视具体情况而定。