全球非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）作为一种日益严重的肝脏疾病，其对肝脏纤维化检测的需求不断增加。肝纤维化（HF）是由于肝脏损伤后的一种常见病理修复反应，是慢性肝病进展至肝硬化的关键步骤。HF的发生机制相当复杂，肝脏受损会导致多种细胞释放众多细胞因子，从而启动信号转导通路，激活肝星状细胞（HSCs），并使其转化为肌成纤维细胞（MFBs）。MFBs能够分泌大量细胞外基质（ECM），进一步破坏肝脏的正常结构，导致HF的发展。目前，HF相关的治疗靶点仍处于动物实验阶段，尚未进入临床应用。

细胞因子诱导机制中，转化生长因子β（TGF-β）在调节细胞生长、分化、ECM重构及内皮间质转化等方面起着重要作用。TGF-β家族在哺乳动物中包括三种亚型（TGF-β1，TGF-β2和TGF-β3），它们的序列和结构高度相似，具有相似的生物功能，尤其是TGF-β1在多种组织中的表达水平和生物活性突出，对纤维化疾病的发展影响显著。TGF-β信号通路是HSC活化和ECM生成的重要信号通路。当肝脏受到损伤刺激时，TGF-β通过结合TGF-βⅡ型受体（TβRⅡ）启动信号传导，并招募TGF-βⅠ型受体（TβRⅠ），随后发生构象变化，使下游的SMAD2和SMAD3蛋白持续磷酸化，形成复合物并转移至细胞核，调节多个靶基因如α-SMA和CTGF的转录，最终促使HSC的活化及Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成，而SMAD7则对该通路进行抑制。

在研究中，LX-2细胞作为最广泛应用的HSCs体外模型，保留了活化HSCs的关键特征，如细胞因子信号传导和纤维形成等，广泛用于肝炎及纤维化的体外研究。LX-2细胞通常在含10% FBS和1%青霉素-链霉素溶液的高糖DMEM完全培养基中进行常规培养，待细胞生长至80%～90%时进行传代；使用胰酶消化收集细胞，并按适宜密度接种于培养孔中，实验前则需用1%血清DMEM进行饥饿处理24小时。细胞分为正常组和模型组，模型组利用10 ng/mL TGF-β1诱导LX-2细胞活化，24小时后收集细胞以进行模型评估。

需要注意的是，TGF-β1诱导细胞纤维化的过程中，血清饥饿处理、细胞密度、因子浓度和作用时间均会影响模型的成功建立。在实验初期，建议尝试不同的细胞密度、诱导浓度和时间，以获得最佳效果。文献中一般采用5–10 ng/mL的TGF-β1进行24–48小时的处理，具体浓度和时间可根据细胞反应程度来调整。

纤维化模型的常用评估方法包括检测纤维蛋白的合成和沉积、观察细胞形态的变化以及测定相关蛋白和基因的表达水平。通过这些评估手段，能够全面了解细胞纤维化的发生过程及机制。经过TGF-β1处理后，LX-2细胞的形态从多角形或短梭形转变为纺锤形或梭形。利用Transwell法可检测LX-2细胞在TGF-β1刺激下的迁移能力，同时通过EdU检测模型组细胞的增殖能力显著提升。此外，利用免疫荧光（IF）、西方印迹（WB）或PCR检测α-SMA与CollagenⅠ在LX-2细胞中的表达情况发现，模型组中这两种蛋白的表达均有所增加；WB结果显示TGF-β1显著上调了Smad2与Smad3的磷酸化，同时抑制了Smad7的表达。

尊龙凯时公司提供的重组TGF-β1蛋白具低内毒素、高纯度、高活性和高批间一致性，适用于各种细胞培养，且该产品在CiteAb引用中名列前100。此外，公司现有多种TGF-β相关产品，能够满足靶向TGF-β药物研发、功能评估和质量控制等多方面的需求。重组人TGF-β1的特异性活性为≥20 x 10⁷ IU/mg，并与人类TGF-β1标准相对标定，为研究提供了可靠的工具。

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