尊龙凯时的细胞培养条件如下:
气相:95%空气 + 5%二氧化碳;温度:37℃。
细胞培养基使用1640培养基,添加2 mM L-glutamine,并调整为含有15 g/L sodium bicarbonate、45 g/L glucose、10 mM HEPES和10 mM sodium pyruvate,同时补充0.05 mM 2-mercaptoethanol和0.4 mg/ml G418,最终配制时使用90% FBS和10%新鲜培养基。
传代方法:
建议在细胞生长到适宜的密度后进行传代,通常建议比例为1:2。每两天更换培养液,确保细胞处于良好的生长状态。
收到细胞后,先不要打开瓶盖,请务必核对培养瓶的细胞名称与您所订购是否一致,并检查瓶子是否有破损或漏液。如无异常,建议在显微镜下观察细胞的生长情况,并在不同倍数下拍照保存以作为售后依据。前三天的照片尤为重要,不提供照片的情况下,会默认状态良好。
- 弃去培养液,使用不含钙、镁离子的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞变化。若细胞大部分变圆并脱落,立即终止消化并添加完全培养基。
- 轻轻吹打细胞使其完全脱落,转移至离心管中,离心后弃去上清液,重悬于1-2 ml完全培养基中。
- 按照1:2的比例分瓶传代,补充新培养基至每瓶5-8 ml,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
某些细胞在运输过程中可能会发生脱落,这是正常现象。如细胞脱落较多,请将培养液收集至离心管中处理,确保细胞活动的最大化。
当细胞覆盖培养瓶的80%时,弃去培养液,使用PBS洗涤一次;添加胰蛋白酶消化液,观察后终止消化,离心后加入无血清冻存液进行细胞冻存。冻存细胞应存放于-80℃冰箱,必要时转入液氮罐中。细胞复苏过程应快速且小心,确保存活率最佳。
如在实验过程中遇到问题,请及时与尊龙凯时联系,我们将根据情况提供相应的售后支持,确保您的研究工作顺利进行。